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可以发现瞬时转染和稳定转染之间差异的文章

浏览数:520     发布时间:2019-09-08
 
瞬时转染原理与稳定转染的相同点和不同点。
将瞬时和稳定转染都转染到表达目的蛋白质的特定哺乳动物细胞中。
不同之处在于外源基因不会转染到细胞染色体中,而是存在于游离载体中,因此基因表达产物在短时间内获得,但继续分裂并作为细胞生长,最终源基因丢失,重组蛋白的生产将不会继续。然而,当细胞稳定转染时,外源基因被转染到细胞的染色体中,靶基因不会随着细胞的通过而消失。稳定转染的细胞系可以长时间稳定地产生目的蛋白质。
图1:瞬时和稳定转染的比较
实验操作的差异。
1)
瞬时转染不同于用于稳定转染的质粒。瞬时质粒不需要具有抗性,用于稳定转染的质粒必须对随后的克隆检测具有特异性抗性。
另外,两者中使用的介质和实验试剂是不同的。
2)
构建质粒后,可通过细胞复苏,转染,细胞培养,蛋白质纯化等方法获得目的蛋白。将质粒线性化,然后导入培养的哺乳动物细胞中,通过特定的转染方法完成质粒与细胞的融合,然后进行细胞聚类筛选和筛选。单克隆,细胞继代培养等以获得稳定转染的细胞系。
稳定的细胞系在很长一段时间内生长以产生目的蛋白质。